杜克雷嗜血桿菌全細胞溶解產(chǎn)物的LXQ測定
本文描述了快速和靈敏的對全細胞溶解產(chǎn)物分析方法,首先是快速簡單的1D-SDS PAGE分離,然后是LXQ線性離子阱的LC/MSn分析。數(shù)據(jù)清楚表明LXQ具有很好的分析速度和靈敏度,非常適合于分析蛋白質(zhì)復雜樣品。延長的色譜梯度分離,結(jié)合凝膠分離降低了樣品的復雜性,增加了SEQUEST可搜索MSn譜圖的數(shù)量,隨后的蛋白質(zhì)識別可靠性。在這個實驗中,45分鐘的運行時間內(nèi)識別出79個蛋白質(zhì);梯度時間延長到150分鐘時,可識別222種蛋白質(zhì);將全細胞溶解產(chǎn)物凝膠帶分隔成5個明顯的切片時,利用150分鐘時間梯度,識別出360種蛋白質(zhì)。使用2D-凝膠分離經(jīng)常丟失的,與發(fā)病機理相關(guān)的不同大、小膜蛋白和大分子蛋白質(zhì)也同樣被識別。通過使用更長的時間梯度,兩個分常大懸浮蛋白質(zhì)(>450 kDa)也被識別。
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