蜜桃传媒麻豆99成人|亚洲人妻中文字幕成人亚洲精品久久|色噜噜av学生中文精品深夜福利亚洲一区二区|亚洲午夜福利在线观看国产精品久久久久国产三级试频|老熟妇露脸嗷嗷叫91九色久久久精品.com|91精品国产高清久久久久久|精品日产乱码久久久久久仙踪林|日韩精品一区不卡|久久精品国产99国产精|国产91精品对白露脸全集观看,色噜噜噜噜噜噜噜噜,中文字幕国产2021,亚洲成人第四色

本文節(jié)選自來自美國賓州大學的研究人員發(fā)表的文章“Manufacturing Strategy for the Production of 200 Million Sterile Doses of an mRNA Vaccine forCOVID-19”,。

質量控制

確定mRNA產物的長度

在疫苗的終制劑中應該出現的mRNA序列應該和設計的完全一致,；序列應該包括5’帽,、5’和3’ UTR、編碼全長刺突蛋白的部分以及poly(A)尾,。本方案中完整mRNA序列的長度正好為4,079個堿基。

必須有一個步驟來確定所生產的mRNA是全長的mRNA,，以確保高的翻譯效率,。為此，將從每個體外轉錄反應的產物中提取樣本,，并使用RNA凝膠電泳試劑盒對產物進行RNA凝膠電泳,。在凝膠電泳過程中，帶負電荷的mRNA向陽極移動,。較短的RNA片段會比較長的RNA片段遷移得更遠,，所以這個過程可以用來確定體外轉錄反應的mRNA產物是否大部分是全長度的mRNA。凝膠應顯示不少于90%的產物為全長mRNA,。凝膠電泳結果如下圖所示,。另一種選擇是對mRNA產物進行測序；不過,，這種方法相對耗時且昂貴,，凝膠電泳能夠揭示想要的結果。

RNA凝膠電泳,。條帶代表特定長度的RNA,。

生產過程模塊示意圖

mRNA生產過程整體工藝流程圖 

確定脂質納米顆粒的粒徑

確定脂質納米顆粒(LNP)的粒徑是非常重要的；為了使疫苗發(fā)揮大效力,，LNP大約需要達到80 nm,。為了確定在我們的微流控設備中生產的LNP的大小，將使用動態(tài)光散射(DLS)技術,。DLS使用散射光來確定給定顆粒的粒徑,。在微流控步驟過程中，將進行4次DLS分析,。

檢測內毒素水平

全球的大部分監(jiān)管機構都要求生產的所有藥品都要進行檢測，以確定藥品中的內毒素水平,。革蘭氏陰性菌具有內毒素,，這些內毒素對人體毒性很大。為確保疫苗不受內毒素污染,，在工藝過程的后稀釋步驟之后,，將進行鱟變形細胞溶解物 (LAL) 檢測。LAL檢測法是一種標準的分析方法,，被FDA認定有效,，其可檢測內毒素水平。因此，選擇LAL法作為內毒素檢測的方法,。mRNA疫苗可接受的內毒素水平應小于10內毒素單位 (EU)/mL,。

產品的包裝和儲存

經過后的稀釋和質量控制步驟后，產品將被包裝成小瓶,。每個2 mL玻璃瓶將包含0.45 mL的產品冷凍懸液,。根據輝瑞目前的生產工藝，每個小瓶都使用溴丁基橡膠塞和鋁密封件密封,，鋁密封件上有可翻轉的塑料蓋,。小瓶將根據FDA法規(guī)的要求，以運輸集裝箱發(fā)送,。每個集裝箱將容納5個托盤的疫苗,，每個托盤容納195瓶，相當于1,170劑,。本方案的生產過程總共產生2億劑,，每周生產1,540萬劑。這相當于每周生產200萬瓶,，每周2,100個集裝箱,。小瓶包裝的過程將是機械工程策略的一部分，不屬于本項目的范疇,。

集裝箱需要按照FDA規(guī)定進行儲存和運輸,。如前文所述，疫苗將需要超低溫冷凍冰箱 (-80℃至-60℃之間),，冷凍冰箱(-25℃至-15℃之間)多存放兩周,，冰箱(2℃至8℃之間)多存放120小時/5天。

原文：I.Labarta, S.Hoffman, A.Simpkins, Manufacturing Strategy for the Production of 200 Million Sterile Doses of an mRNA Vaccine for COVID-19. 2021.