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循環(huán)制備色譜法是一種有趣的可分離兩種緊密洗脫組分的技術(shù),，它通過增加色譜柱的長度而實現(xiàn)峰的分離,。當其他優(yōu)化方法如降低流量或改變?nèi)軇┨荻纫廊徊荒芨淖兡繕朔宓姆蛛x效果時,，它可以作為一種非常有效替代方法而發(fā)揮作用,。

在之前的文章中（循環(huán)制備液相色譜 —— 解決未分離混合峰組的分離難題）我們介紹了一種循環(huán)制備色譜方案來解決共洗脫峰的分離，該方案采用了一根色譜柱,，通過閉環(huán)循環(huán)的方式將峰組反復循環(huán)至色譜柱內(nèi)進行分離,，每次循環(huán)時，峰組都會經(jīng)過泵,。

圖1：閉環(huán)循環(huán)制備色譜的原理

該閉環(huán)循環(huán)方式的優(yōu)點是溶劑消耗將很低,，在峰被收集之前，不會產(chǎn)生新的溶劑消耗,，僅靠管路內(nèi)部溶劑即可實現(xiàn)循環(huán)和分離,。但它的主要缺點是系統(tǒng)的死體積較大，每次循環(huán)時,，管線,、泵頭或混合器都將增加死體積,，這將導致組分在離開色譜柱后會有少量組分重新混合,。因此，每循環(huán)一次都將顯著增加峰展寬,。

圖2：閉環(huán)循環(huán)色譜法分離萊苞迪甙A和甜菊苷

今天我們將介紹一種改進的循環(huán)制備方法,，它的優(yōu)點是有更好的峰分離度。該方法將由兩個相同的色譜柱來實現(xiàn)循環(huán)分離。通過柱切換閥,，從柱1上洗脫后的目標峰被重新注入柱2,，組分將不再經(jīng)過泵。

圖3：改進的循環(huán)制備法的流路

通過柱選擇閥的切換,，洗脫的目標峰將沿著兩個通道移動：從柱1到UV 1,，到柱2，從柱2到UV 1,，到柱1（見圖4）,。每次切換后，峰都可以離開色譜柱進入第二個UV檢測器（UV 2）,，然后通過收集器收集目標峰,。

（A：柱1→UV 1→柱2；B：柱2→UV 1→柱1）

我們采用這種改進的循環(huán)方法對圖2示例中的萊苞迪甙A和甜菊苷的混合溶液進行了分離,，分離效果見圖5,。藍色譜圖為UV1的循環(huán)檢測信號，紅色譜圖為UV2的監(jiān)測信號,，從UV1的監(jiān)測信號中,，我們可以看出，組分總過6次經(jīng)過色譜柱分離后,，已基本實現(xiàn)了良好的分離,，其分離效果較圖2的閉環(huán)循環(huán)提高明顯。兩個組分循環(huán)6次后,，將終止循環(huán),，通過閥切換，組分進入UV2進行檢測,，并通過軟件的自動峰識別對兩個組分進行自動收集,。

圖5：改進的循環(huán)制備法的分離萊苞迪甙A和甜菊苷（洗脫流速：3.5 ml/min；流動相：70%水+30%乙腈,；UV波長210nm,；樣品濃度：0.2mg/ml）

改進的循環(huán)色譜方法，顯著提高了目標峰的分辨率,。雙檢測器的配置,，可以在一次運行中能實時監(jiān)測并支持方法開發(fā)的過程。通過軟件上的自動峰識別功能,，就可以自動識別峰和自動收集,，使得循環(huán)制備方法更加簡便和重復。

圖8：LUMTCH Calmflow循環(huán)制備系統(tǒng)