在四極桿LC-MS系統(tǒng)上通過精確質(zhì)量校正來篩查寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑CBD油中的真菌毒素
在寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑中添加CBD油,可以有效改善寵物從焦慮到腫瘤的各種疾病。我們使用液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)對實際的CBD油寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑樣品進(jìn)行了非靶向分析,,以篩查產(chǎn)品中真菌毒素的存在,。
實 驗
1. 儀器與材料
含CBD油的寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑樣品用二氯甲烷稀釋500倍。然后將50微升稀釋后的樣品加入950微升甲醇中,。在Agilent 1260 Prime / 6125 LC/MS XT系統(tǒng)上進(jìn)行分析,,色譜柱為Poroshell C18(2.1 mm x 100 mm, 1.9μm),流動相A為0.1% (v/v)甲酸-水溶液,,流動相B為0.1% (v/v)甲酸-甲醇溶液,。流動相梯度變化為72% A ~ 95% A,運(yùn)行時間為15分鐘,,后運(yùn)行時間為2分鐘,。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)校正
圖1為五種真菌毒素的大麻籽油加標(biāo)樣品的TIC圖。
圖1:五種真菌毒素的大麻籽油加標(biāo)樣品在MassWorks
軟件中,,黃曲霉毒素B2作為質(zhì)譜校正標(biāo)樣,,將單四極桿LC/MS數(shù)據(jù)校正為精確質(zhì)量數(shù)據(jù),校正的質(zhì)量誤差小于1mDa,,譜圖準(zhǔn)確度(Spectral Accuracy)優(yōu)于99%,,見圖2。
圖2:MassWorks質(zhì)譜校正結(jié)果,。
為了驗證該方法對精確質(zhì)量測量的準(zhǔn)確度和對未知真菌毒素的鑒定能力,,我們在MassWorks將該校正應(yīng)用于五種真菌毒素,即可得到它們的精確質(zhì)量數(shù)據(jù),,并以±20mDa質(zhì)量誤差窗口和C/H/N/O/Cl作為可能的元素,,使用CLIPS功能對它們進(jìn)行分子式分析,得到分子式的譜圖準(zhǔn)確度結(jié)果,,見圖3,。
圖3:五種真菌毒素的精確質(zhì)量和分子式譜圖準(zhǔn)確度結(jié)果
從圖3的結(jié)果可以看出,結(jié)合MassWorks的精確質(zhì)量和譜圖準(zhǔn)確度,,我們可以對5種真菌毒素中的4種進(jìn)行可靠的鑒定,。例如,黃曲霉毒素G2,測定的質(zhì)量誤差僅為0.5 mDa,,分子式的譜圖準(zhǔn)確度為98.1%,,排在全部89個候選分子式的第一位,說明了MassWorks對它實現(xiàn)了準(zhǔn)確的鑒別,。而赭曲霉毒素A由于其極低的信號響應(yīng)和質(zhì)譜干擾,,降低了其鑒別結(jié)果的置信度,它的譜圖準(zhǔn)確度僅為86.0%,。
圖4:黃曲霉毒素G2的鑒定結(jié)果表明,,排序第一的分子式譜圖準(zhǔn)確為98.1%,理論同位素和校正同位素完美匹配
3. 樣品分析結(jié)果及討論
當(dāng)我們將校正應(yīng)用于大麻籽油樣品TIC圖中的主峰時,,我們發(fā)現(xiàn)用C/H/N/O/Cl元素進(jìn)行的CLIPS檢索鑒定不能解釋A+2信號,,只有添加S元素后才能對其進(jìn)行高譜圖準(zhǔn)確度的鑒定,這也表明了該化合物肯定含S元素,,分析結(jié)果見圖5,。
圖5:大麻籽油TIC主峰的分析結(jié)果表明,該物質(zhì)的分子式為C16H27N3S,,精確質(zhì)量誤差為14.4mDa,,譜圖準(zhǔn)確度為98.98%
對寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑樣品#1,我們想知道MassWorks的精確質(zhì)量校正方法是否能夠區(qū)分CBD化合物和5種真菌毒素之一的黃曲霉毒素B2,,因為兩者的整數(shù)質(zhì)量均在m/z 315處,。圖6下方的XIC圖表明了m/z 315主要在10min后出峰,我們將對這幾個峰進(jìn)行MassWorks軟件的CLIPS分析,。
圖6:寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑樣品#1的TIC圖和m/z 315的XIT圖
Rt=10.25min峰的精確質(zhì)量測定結(jié)果為m/z 315.2312,,質(zhì)量誤差小于1mDa,排序第一的分子式C21H30O2的譜圖準(zhǔn)確度為98.2%(見圖7),,結(jié)果表明該物質(zhì)為CBD化合物,。盡管它的整數(shù)質(zhì)量與黃曲霉毒素B2一樣,但是精確質(zhì)量和譜圖準(zhǔn)確度告訴我們,,我們可以正確地區(qū)別和鑒定它們,。
圖7:CBD化合物的鑒定結(jié)果
通過CLIPS分析還正確地確認(rèn)了在10.5min峰位置中發(fā)現(xiàn)的CBD同分異構(gòu)體,質(zhì)量誤差為-10mDa,,譜圖準(zhǔn)確度為94.8%,,見圖8。
圖8:CBD的同分異構(gòu)體的鑒定結(jié)果
10.65min峰的CLIPS未知元素組成分析表明,,它不屬于CBD類,,也與黃曲霉毒素B2完全不同。
圖9:10.65min峰的分子式結(jié)果為C23H24O,,譜圖準(zhǔn)確度為98.37%
最后一個11min峰的結(jié)果表明,,它是另一種類型的CBD化合物,,其質(zhì)量精度為7mDa,光譜精度為98.9%,。
圖10:11min峰的分子式結(jié)果為C21H32O3,,譜圖準(zhǔn)確度為98.87%
結(jié)論
1)單四極桿LC/MS系統(tǒng)可以獲得精確質(zhì)量和譜圖準(zhǔn)確度,,這可以幫助我們?nèi)ミM(jìn)行未知物的鑒定,,是一種有用且經(jīng)濟(jì)的寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑分析工具,可用于活性CBD化合物或可能的真菌毒素污染物的篩查,。
2)盡管一些化合物有相同的整數(shù)m/z,,但MassWorks的精確質(zhì)量和譜圖準(zhǔn)確度能對他們進(jìn)行鑒定和區(qū)分,如本文中的CBD和黃曲霉毒素B2(整數(shù)質(zhì)量都在m/z 315處),。
關(guān)于MassWorks
軟件MassWorks軟件是由 Cerno Bioscience 公司開發(fā)的一款革命性的MS數(shù)據(jù)定性分析軟件,,能幫助我們在低分辨率的四極桿GC/MS、LC/MS直接測定化合物的精確質(zhì)量,,并通過獨有的譜圖準(zhǔn)確度概念確定出準(zhǔn)確的分子式,。MassWorks軟件同樣適用于高分率質(zhì)譜(TOF、Orbitrap)的定性分析,。
關(guān)于綠綿科技
綠綿科技是Cerno Bioscience公司在中國區(qū)的總代理商,,負(fù)責(zé)Cerno公司旗下的MassWorks、GC/ID 等產(chǎn)品市場推廣,、銷售,、售前/售后技術(shù)支持、應(yīng)用支持,。若您想了解獲取 MassWorks 產(chǎn)品的更多信息或應(yīng)用,,歡迎致電綠綿科技!
關(guān)于綠綿科技
北京綠綿科技有限公司(簡稱:綠綿科技)以體現(xiàn)客戶服務(wù)價值為宗旨,,以專業(yè)精神和技能為廣大實驗室分析工作者提供樣品前處理,、樣品制備及分析、實驗數(shù)據(jù)精確分析和管理的全面解決方案,,致力于協(xié)助客戶提高分析檢測的效率和水平,。主要代理產(chǎn)品聯(lián)系電話:010-82676061/2/3/4/5/6/7/8
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