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　　在HPLC分析中,，我們通常使用小粒徑色譜柱（如≤5μm）、較低的洗脫流速,、改變流動相梯度的方式來實現(xiàn)對洗脫時間非常接近的兩個組分的分離,。當(dāng)HPLC的流速提升至半制備和制備的流速水平時，由于液相色譜耐壓的限制,，小粒徑的色譜柱已經(jīng)不能適用,，而是改用大粒徑的色譜柱，但這也帶來一個問題,，兩個緊密洗脫的組分可能分離不開,，使得要收集它們的“純組分”將變得很困難,。

　　循環(huán)制備色譜法是一種能夠有效分離緊密洗脫組分的技術(shù)，它將未分離的目標(biāo)組分峰反復(fù)循環(huán)回流至色譜柱內(nèi)繼續(xù)分離,，通過“延長”色譜柱長度實現(xiàn)組分的最終分離并收集,。當(dāng)在傳統(tǒng)制備色譜上采用如降低洗脫流速或改變洗脫梯度依然不能得到良好的分離效果時，循環(huán)制備色譜法將會是一種很好的解決方案,。

KNAUER 循環(huán)制備液相色譜

　　如圖1所示,，(+/-) -α-生育酚，當(dāng)使用5μm粒徑色譜柱（紅色）時,，兩個組分可以實現(xiàn)較好的基線分離,；而使用10μm粒徑色譜柱（黑色）的分離度嚴(yán)重下降，這時候想要收集兩種α-生育酚的純凈組分是不可能的,，但通過峰循環(huán)的方式,，在經(jīng)過第四次峰循環(huán)之后，兩個組分已經(jīng)實現(xiàn)了基線分離,，這時我們就可以收集它們各自的純凈組分,。

圖1：(+/-) -α-生育酚的循環(huán)色譜分離

　　傳統(tǒng)的制備色譜在目標(biāo)組分從色譜柱中洗脫后,，直接在餾分收集器或收集閥處進(jìn)行組分的收集（如圖2-上）,，當(dāng)目標(biāo)峰分離不佳時，我們通過收集閥的切換,，開啟循環(huán)模式（圖2-下）,，洗脫后的目標(biāo)峰通過泵被重新循環(huán)色譜柱中進(jìn)行分離，重復(fù)這個過程,，直至目標(biāo)峰被完全分離,。

圖2：循環(huán)制備色譜的原理